【Использование по назначению】

Набор представляет собой зонд TaqMan для флуоресцентной ПЦР в реальном времени для качественного обнаружения ORF1ab, нуклеиновой кислоты генов N 2019-nCoV в мазке из зева, мокроте у пациентов с подозрением на симптомы пневмонии и случаи кластеризации.

Результаты теста предназначены только для клинической справки и не могут рассматриваться только как ориентир для клинической диагностики. Рекомендуется проводить явный анализ с учетом клинических симптомов и других результатов лабораторных исследований.

Операторы должны иметь опыт профессиональной подготовки в области амплификации генов или тестирования методов молекулярной биологии, а также иметь соответствующую квалификацию для работы в лаборатории. Лаборатория должна иметь разумные меры предосторожности в отношении биологической безопасности и защитные процедуры.

【Принцип тестирования】

В этом наборе праймеры и зонды предназначены для консервативных и специфических областей ORF1ab, N 2019-nCoV, соответственно. Флуоресцентная ПЦР используется для обнаружения вирусной РНК после очистки образца РНК от нуклеиновых кислот.

В этом тестовом наборе используется технология флуоресцентной ПЦР в реальном времени. Во время амплификации ПЦР зонд связывается с матрицей, и 5'-концевая репортерная группа зонда расщепляется ферментом Taq (экзонуклеазная активность 5'→3'), тем самым удаляясь от гасящей группы, чтобы генерировать флуоресцентный сигнал. Кривая усиления в реальном времени автоматически строится на основе обнаруженного сигнала флуоресценции, и рассчитывается значение Ct образца (количество циклов, когда сигнал флуоресценции в каждой реакционной пробирке достигает установленного порога). Флуорофоры FAM, VIC и Texas red используются для маркировки гена ORF1ab и зондов гена N в реакционном растворе. Используя один тест, можно одновременно провести качественное обнаружение двух вышеуказанных генов 2019-nCoV.

Во избежание ложноотрицательного результата набор снабжен внутренним контролем (IC), помеченным флуоресцентной группой Cy5, который можно использовать для наблюдения за процедурой экстракции и реакционным раствором.

【Основные компоненты】

Примечание¹: Различные партии компонентов не могут быть заменены.

Примечание²: Тестовый набор не содержит реагент для выделения нуклеиновой кислоты, подготовьте реагент перед использованием.

1. Работа с образцами

Добавьте 10 мкл внутреннего контроля в 200 мкл положительного контроля и отрицательного контроля, соответственно , чтобы выполнить экстракцию нуклеиновой кислоты.

2. Подготовка реагентов:

Подготовка системы: возьмите предварительно установленный лиофилизатор для амплификации нуклеиновых кислот, после чего откройте пакет из фольги и немедленно центрифугируйте его. Количество образца для каждого теста должно быть кратно 8, включая один положительный контроль и один отрицательный контроль. Добавьте 35 мкл воды, не содержащей нуклеаз, в каждую реакционную пробирку.

3. Загрузка образца:

Добавьте 5 мкл образца нуклеиновой кислоты для тестирования, положительный контроль, отрицательный контроль, чтобы весь реакционный объем составлял 40 мкл в выделенном реакционном растворе. Поскольку это не требует тонкой смеси, и просто закройте крышку реакционной пробирки для ПЦР, отцентрифугируйте жидкость в стенке пробирки на дне пробирки, таким образом обрабатывая усиление ПЦР.

После проверки считается, что добавление 5–10 мкл парафинового масла в систему ПЦР не повлияет на результат ПЦР, но позволит избежать загрязнения и испарения жидкости.